第一个实验：多聚同一核苷酸的翻译
Nirenberg M W和Matthaej J H 采用人工合成的多核苷酸链，在无细胞蛋白合成系统中寻找氨基酸和三联体密码子的对应关系。
第二个实验：核糖体结合技术
以人工合成的三核苷酸，在含核糖体、AA-tRNA的适当离子强度的反应液中保温。使反应液通过硝酸纤维素滤膜，游离的AA-tRNA因相对分子质量小能自由通过滤膜。加入三核苷酸模板可以促使其对应的AA-tRNA结合到核糖体上，体积超过膜上的微孔而被滞留，这样就能把已结合到核糖体上的AA-tRNA与未结合的AA-tRNA分开。用14C标记特定氨基酸，从模板三核苷酸与氨基酸的关系可测知该氨基酸的密码子。
第三个实验：多聚重复核苷酸的翻译
Jones,Khorana利用有机化学和酶法制备了已知的核苷酸重复序列，以此多聚核苷酸作模板，在体外进行蛋白质合成，发现可以生成三种重复的多肽链（下图C）。若从A翻译，则合成出多聚Ile，即AUC对应Ile；若从U翻译，则合成出多聚Ser，即UCA对应Ser；若从C翻译，则合成出多聚His，即CAU对应His。这是因为体外合成是无调控的合成，可以随机地从A、或U、或C翻译，所以有三种重复的多肽链生成。
tRNA的架构和功能：
说到tRNA的架构和功能，小编我觉得还是很好理解的。首先，tRNA的二级结构受体臂（acceptor arm） 3' 端的最后3个碱基序列永远是CCA，最后一个碱基的3' 或2' 自由羟基（-OH）可以被氨酰化。接着小编我和大家讲解下，TψC臂是根据3个核苷酸命名的，其中ψ表示拟尿嘧啶。反密码子臂含有三联反密码子。D臂中含有二氢尿嘧啶（dihydrouracil）。可变臂，tRNA大小变化最大的区域。
核糖体的功能和结构：
核糖体（或称核糖核蛋白体）由蛋白质和rRNA组成，是存在于细胞质内的微小颗粒。小编我觉得这样的概念还是很好理解的。接着，小编来给大家说下核糖体的基本功能：结合mRNA，在mRNA上选择适当的区域开始翻译密码子（mRNA）和反密码子（tRNA）的正确配对、肽键的形成。
核糖体的存在：核糖体可游离存在，真核中，也可同内质网结合，形成粗糙的内质网。原核中，与mRNA形成多聚核糖体。核糖体的活性位点：A位点(氨酰基tRNA 位点，amino acyl-tRNA site)在延伸过程中与进入的负载tRNA结合。P位点(肽酰tRNA 位点，peptidyl-tRNA site)与携带新生多肽链的tRNA结合。E-位点(退出位点，Exit site),脱酰-tRNA占据的位点，空载的tRNAs从此位点被排出。肽基转移酶位点，在50S亚基上，提供肽键形成的催化活性。EF-G结合位点，其活性是核糖体在mRNA移位所必需的多肽出口位点，核糖体通过这个区域附着在膜上。
肽链合成的起始：
肽链的合成有几个步骤，小编现在和大家讲解一下。第一步，30S小亚基首先与翻译起始因子IF-1，IF-3结合，通过SD序列与mRNA模板结合。第二步，在IF-2和GTP的帮助下，fMet-tRNA进入小亚基的P位，tRNA上的反密码子与mRNA上的起始密码子配对。第三步， IF-1，IF-3释放，带有tRNA，mRNA的小亚基复合物与50S大亚基结合，GTP水解，释放翻译起始因子IF-2 。
翻译起始因子：细菌有3种起始因子IF-1，IF-2和IF-3。①IF-3是30S亚基与mRNA起始位点的特异结合所必须的。② IF-2特异地和起始tRNA结合，并把它带到起始复合体中。③ IF-1结合于A位点，阻止氨酰-tRNA的进入。
其中，IF3因子具有多重功能：其第一个功能是控制了核糖游离态和结合态之间的平衡。IF-3和游离的30S亚基相结合，但不和70S核糖体结合。当IF-3与30S亚基相结合时，阻止此亚基和50S亚基的结合，其作用实际上是抗缔合因子(antiassociation factors)。IF-3的第二个功能是控制30S亚基与mRNA结合的能力，小亚基失去此因子 就不能和mRNA形成起始复合体(但mRNA上SD位点的选择是核糖体亚基的功能，IF-3并不涉及特异位点的选择)。在30S亚基和50S亚基结合之前，IF-3被释放出来。最后一个功能是参与识别起始氨酰-tRNA。
另外，小编和大家讲解下起始tRNA的特征：仅在tRNAifMet 中，接受臂的最后一对碱基不能互补配对；此特征对甲酰化反应是必需的；如果通过突变使这两个碱基互补配对，tRNAifMet就能参与延伸反应；tRNAifMet反密码子臂茎部有3个G·C对，是fMet-tRNAi 进入P位点的必要特征。
起始过程中mRNA和rRNA的碱基互补配对：
SD序列：原核mRNA起始密码子AUG上游约10bp左右的寡聚嘌呤序列AGGAGG,可以和16S rRNA的3’端互补配对。多顺反子mRNA中，各基因的翻译其实过程是相互独立的。
好了，今天关于生物蛋白技术的学术讲解就到这里了，内容有点长，但是值得各位学者读完，希望我的专业知识能够帮助大家解答困惑，如果有什么问题也可以在下方评论区咨询我哦！
